Material 5a: Lösung
Aufgabe
![Schema guide-RNA](abb1.png)
Abbildung erstellt durch Frank Harder, ZPG Biologie
Die bestellte guide-RNA ist zum Bereich der DNA, in welchem der Doppelstrangschnitt erfolgen soll, komplementär. Dadurch wird der CRISPR-Cas9-Komplex an diese Sequenz binden und einen Doppelstrangschnitt an der Grenze von Intron-4- zu Exon 5- durchführen
Die DNA, die für die homologe Rekombination bestellt wurde, besitzt homologe Bereiche, die denen der Bereiche um die Schnittstelle herum entsprechen (homologe Randbereiche). Da die Spleißstelle vor Exon-5 für die Spleißenzyme nicht mehr erkennbar sein darf, ist dieser Bereich durch Einfügen einer stark abgeänderten Basensequenz unkenntlich gemacht.
![Schema homologe Rekombination](abb2.png)
Abbildung erstellt durch Frank Harder, ZPG Biologie
Sofern die Schnittstelle mithilfe homologer Rekombination repariert wird, ist der Intron-4-Exon-5-Übergang nicht mehr erkennbar. Dadurch wird aus der prä-mRNA Exon-5 zusammen mit Intron-4 herausgespleißt, sodass kein funktionales dsx-female mehr entstehen kann. Dadurch ist die Bildung fertiler Weibchen nicht mehr möglich.
![Schema homologe Rekombination 2](abb3.png)
Abbildung erstellt durch Frank Harder, ZPG Biologie
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