Material 5b: CRISPR-Cas Anopheles
Wiederholung:
In den Materialien 1 und 2 haben wir uns mit der Sexualentwicklung der Anophelesmücken beschäftigt und dabei gelernt, dass durch alternatives Spleißen der prä-mRNA des doublesex-Gens von Anopheles gambiae zwei unterschiedliche Proteine (dsx-male und dsx-female) gebildet werden, welche die Ausprägung des männlichen und weiblichen Phänotyps bedingen. Um lebensfähige, aber unfruchtbare Weibchen zu erzeugen, sollte der Spleißvorgang, der letzlich zur Bildung der mRNA des Proteins dsx-female führt, durch Veränderung der Basensequenz im Übergang von Intron 4 zu Exon 5 unterbunden werden. Hierfür werden Kenntnisse der Basenabfolge dieses Bereichs benötigt.
Abbildung 1 zeigt die Basensequenz des doublesex-Gens im Bereich des Übergangs von Intron 4 zu Exon 5. Die Abbildungen 2 und 3 zeigen die Internetauftritte der Firmen World of CRISPR technologies und Genetic solutions mit Bestellfenstern für Nuclotidsequenzen. Abbildung 4 zeigt den Übergang von Intron-4 zu Exon 5 des doublesex- Gens ohne Basensequenz.
Abbildungen erstellt durch Frank Harder, ZPG Biologie
Abbildungen erstellt durch Frank Harder, ZPG Biologie
Aufgaben:
- Erweitern Sie im Bestellfenster für guide-RNA (Abbildung 2) die guide-RNA-Sequenz bis zum 3 ́-Ende.
Tragen Sie in das Bestellfenster DNA (Abbildung 3) eine mögliche Sequenz für den Einsatz der homologen
Rekombination ein.
Begründen Sie die von Ihnen bestellte Nucleotidabfolgen. - Tragen Sie die von Ihnen genetisch veränderte Sequenz in die Abbildung 4 ein.
- Erläutern Sie anhand Ihrer Sequenzen die Prozesse, die zur Veränderung der Basensequenz im Intron-4- Exon-5-Übergang führen und damit die Bildung von funktionsfähigem dsx-female unterbinden.
Verwenden Sie gegebenenfalls bereitgestellte Hilfen!
Abbildungen erstellt durch Frank Harder, ZPG Biologie
Abbildungen erstellt durch Frank Harder, ZPG Biologie
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