Material 5b: Lösung
Aufgabe 1- Beispiel für eine guide-RNA-Bestellung
Abbildung erstellt durch Frank Harder, ZPG Biologie
Begründung:
Die Sequenz der guide-RNA muss zum Bereich der DNA, in welchem der Doppelstrangschnitt erfolgen soll, komplementär sein. Der Schnitt würde dann direkt vor dem Übergang zwischen Intron 4 und Exon 5 liegen.
Abbildung erstellt durch Frank Harder, ZPG Biologie
Aufgabe 2 - Mögliche DNA-Sequenz für homologe Rekombination
Abbildung erstellt durch Frank Harder, ZPG Biologie
Begründung:
Die durch homologe Rekombination einzubringende DNA muss noch homologe Randbereiche besitzen. Sie darf aber die Spleißstelle vor Exon-5 für die Spleißenzyme nicht mehr erkennbar machen, z.B. durch Einfügen einer stark abgeänderten Basensequenz dieses Bereichs.
Aufgabe 3
Durch die gewählte Sequenz der guide-RNA wird der CRISPR-Cas9-Komplex in der Zelle an diese Sequenz
binden und einen Doppelstrangschnitt an der Grenze von Intron-4 zu Exon 5 durchführen. Durch homologe
Rekombination wird der DNA-Doppelstrangschnitt repariert. Dabei wird die DNA mit dem mutierten Bereich für die
Spleißstelle von Intron-4 zu Exon-5 eingebaut.
Dadurch wird aus der prä-mRNA Exon-5 zusammen mit Intron-4 herausgespleißt, sodass kein funktionales dsx-
female mehr entstehen kann. Dadurch ist die Bildung fertiler Weibchen nicht mehr möglich
Abbildung erstellt durch Frank Harder, ZPG Biologie
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